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      3D數字PCR檢測

      數字PCR即Digital PCR,它是一種核酸分子絕對定量技術。不同于定量PCR是依靠標準曲線或參照基因來測定核酸量,數字PCR則是將傳統PCR的指數倍信號轉換成線性的數字信號,通過特定的儀器讀值,并利用統計學方法來分析PCR產物,是對起始樣品的絕對定量。因此特別適用于依靠Ct值不能很好分辨的應用領域:拷貝數變異、突變檢測、基因相對表達研究(如等位基因不平衡表達)、二代測序結果驗證、miRNA表達分析、單細胞基因表達分析等。
      1. 數字PCR檢測技術進行絕對定量而不依賴內參照標準。有效避免校準品和樣品間背景的不同而引入的偏差和擴增效率的不同
      2. 可對微量 DNA和RNA的細微變化進行準確及重復性極佳的檢測
      3. 精確檢測低拷貝數的目標DNA 分子
      4. 避免了核酸 溶液的雜質或者核酸降解對PCR 動態擴增過程的影響


      流程圖:

              


      實時熒光定量PCR檢測

      實時熒光定量PCR技術,是指在PCR反應體系中加入熒光基團,應用熒光信號積累實時監測整個PCR進程,最后通過標準曲線對目標模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR技術將傳統PCR技術從定性分析飛躍到定量分析。同時,應用范圍更廣、靈敏度更高,極大簡化了傳統PCR方法。以最少的樣本量獲取特異性和可靠性更強、自動化程度更高的實時信息。
      上?;倒纠肁BI 7500/ABI 7900、 StepOnePlusTM等實時熒光定量PCR系統,提供mRNA定量、miRNA定量、IncRNA定量等檢測服務。
      1.特異性強:引物和探針的“雙保險”,有效避免檢測的假陽性。
      2.靈敏度高:分析PCR產物的對數期,自動化儀器收集熒光信號,避免了許多人為因素干擾。
      3.避免污染:全封閉反應,無須PCR后處理。
      4.實現定性到定量的飛躍:運用標準品獲得標準曲線,結合Ct值進行準確定量。
      5.高效低耗:可實現一管多檢。
      6.操作簡便:在線式實時監測擴增結果,不必接觸有害物質。
      7.快速:反應時間<1.5小時。


      原理及流程圖:


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